不同的蛋白質分離純化的方法不同，但蛋白質分離純化的操作步驟基本類似，那么如何進行**蛋白的提取呢？這里總結**蛋白的提取的實驗試劑、操作步驟以及些注意事項。
實驗試劑
采用T7? Tag Affinity Purification Kit
T7?Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液：4.29mM Na2HPO4，1.47 mM KH2PO4，2.7 mM KCl， 0.137mM NaCl，1%吐溫-20，pH7.3 洗脫緩沖液: 0.1M檸檬酸，pH2.2. 中和緩沖液：2M Tris，pH10.4。 PEG 20000。

實驗步驟
1.100ml 含重組表達質粒的菌體誘導后，離心5000g×5min，棄上清，收獲菌體，用10ml預冷的B/W緩沖液重懸。
2. 重懸液于冰上超聲處理，直至樣品不再粘稠，4℃離心 14000g×30min，取上清液，0.45μm膜抽濾后作為樣品液。
3. 將結合T7?Tag抗體的瓊脂充分懸起，平衡至室溫，裝入層析柱中。
4. B/W緩沖液平衡后樣品液過柱。
5. 10ml B/W緩沖液過柱，洗去未結合蛋白。
6. 用5ml洗脫緩沖液過柱，每次1ml，洗脫液用含150μl中和緩沖液的離心管收集，混勻后置于冰上，直接SDS-PAGE分析。
7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中，雙蒸水透析24hr，中間換液數(shù)次。
8. 用PEG 20000濃縮蛋白。
注意事項
蛋白在過層析柱前，要0.45μm膜抽濾，否則幾次純化后，柱子中會有不溶物。

上海嘉鵬科技有限公司專業(yè)生產：紫外分析儀、三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、暗箱三用紫外分析儀、暗箱紫外分析儀、手提式紫外分析儀、三用紫外分析儀暗箱式、紫外檢測儀、部分收集器、恒流泵、蠕動泵、凝膠成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、化學發(fā)光成像分析系統(tǒng)、光化學反應儀、旋渦混合器、漩渦混合器、玻璃層析柱、梯度混合器、梯度混合儀、核酸蛋白檢測儀、玻璃層析柱、熒光增白劑測定儀、餾分收集器、切膠儀、藍光切膠儀、層析系統(tǒng)等產品。歡迎來電咨詢。

上海嘉鵬科技有限公司 www.shjpkj.cn
電話：021-66030766   36162366 
400免費咨詢電話：4000-123-925  
手機：13585698333  18918199710  13501668369  
企業(yè)QQ，2880150292，2880150293，2880150290，2880150297